### 背景介绍

裸露的RNA作为一种带有负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的静电排斥，难以顺利进入细胞，同时也容易受到RNA酶的快速降解。因此，RNA在进入细胞之前需要一种保护性外壳。细胞膜的主要成分是脂质，因此采用脂质囊泡封装RNA可以帮助其穿过细胞膜并释放进入细胞质中。理想的囊泡应具备正电荷，以便能够有效结合带有负电荷的RNA。然而，由于胞内阳离子脂质与带负电的细胞膜产生静电作用，可能导致细胞毒性，因此需要设计能够在内体酸性环境中适应的脂质结构。

### 脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分构成：可离子化的阳离子脂质、两性离子脂质（PL）、胆固醇和PEG化脂质。这些成分协同作用，确保RNA的有效递送和保护。LNP作为mRNA的传递系统，其运作机制涉及多个步骤，能够确保mRNA安全、高效地送入目标细胞，并正确表达蛋白质。在LNP中，可电离的阳离子脂质的作用尤为重要，因为它在自组装成LNP时可以带正电荷，以便载入带负电的RNA，同时在中性pH下保持不带电以减少毒性。在细胞吸收后，随着内体pH降低，这些分子再次带正电荷，促进内体逃逸的过程。而胆固醇和PEG脂质的变体已被证明能够调节LNP的物理性质、纳米结构及最终效果。

### LNP转染实验步骤

以下是针对6孔板单孔的转染步骤，其他培养形式请参考表1。

1. mRNA预混液制备：将25 μg mRNA（浓度为1 μg/μL）与60 μL Buffer混合。
2. mRNA-easyLNP复合物制备：将625 μL mRNA预混液与625 μL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒以确保均匀混合。
3. 加入细胞：将125 μL mRNA-easyLNP复合物添加至细胞中，轻轻晃动以保证均匀分散。
4. 分析时间：培养24-48小时后进行分析。

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