918博天堂淋巴母细胞HMy2CIR培养指南

一、细胞培养条件

在接收到细胞后，应立即按照以下步骤进行处理，确保细胞处于良好状态。最佳的运输细胞方法是将其灌满完全培养液并封好瓶口。首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，再将其放入超净台内实施严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态，随后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的细胞照片（建议分别拍摄40x, 100x, 200x倍），前三天的照片为售后服务的重要依据。若不提供照片，将默认收到的状态良好。

二、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%的汇合度时，应将完全培养液收集至离心管中，保留5ml的完全培养基并放入37℃、5% CO2的培养箱中。若细胞密度超过80%，可进行细胞传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察。如果细胞大部分变圆并脱落，迅速将瓶子拿回来轻敲几下，然后添加超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清液，沉淀细胞后加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请注意佩戴防护面具），快速将其放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重新悬浮细胞，然后接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养；
4. 第二天，使用新鲜完全培养基继续培养。

三、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能不牢固贴壁，导致发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离细胞量较多，可以将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清液进行过渡培养。沉淀后添加胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应，然后再离心，弃去上清液并加1-2ml完全培养基重悬。之后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

四、售后条款

1）如果细胞出现问题，可重发的情况有：
- 在运输途中遭遇的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发；
- 收到细胞后48小时内，如发现污染问题，请提供真实的实验结果，经过核实后可重发；
- 对于常温发货的细胞，静置24小时后或干冰冻存发货的细胞，复苏后24小时若大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），也可重发；
- 对于干冰运输的细胞，若复苏后24小时内出现污染问题，亦可重发；
- 若细胞活性存疑，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法确认细胞活力，核实后将重发；
- 收到细胞当天以及第2、3天须拍照，如3天内未反馈将视为产品合格；如在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片、相关操作详细步骤，并与技术人员沟通，技术人员判断为我方责任则重发，相反则按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题，不予重发的情况有：
- 由客户造成的细胞污染，不予重发；
- 由于客户不正确的操作导致细胞状态不佳，不予重发；
- 使用的细胞培养体系非本库推荐的造成的细胞状态不佳，不予重发；
- 在细胞状态不佳的情况下未提供细胞培养前3天的照片，不予重发；
- 在细胞培养过程中经其他处理的不予重发；
- 收到细胞后2天内未告知出现问题，不予重发；
- 具体情况视实际而定。