918博天堂提供的大鼠肝星形细胞THSC培养手册旨在为研究人员和实验室提供详细的细胞培养指导。以下为细胞培养的关键步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC
生长特性：该细胞在无血清条件下保存和培养。
冻存条件：无血清冻存液。
培养体系：DMEM。
传代方法：建议首次传代比例为1:2。
备注：文化基瓶需使用无菌离心管进行收集，以便进行对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买918博天堂的完整培养基。

二、细胞处理方法

收到的细胞应立刻处理。待细胞健康生长后，加入完整培养液并密封瓶口，以确保运输质量。使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，确保在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续操作。务必在显微镜下观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片保存，前三天的照片将作为售后依据。若未提供照片，则默认为收到状态良好。建议传代后，一瓶使用原始完整培养基，另一瓶使用自配基，以便对比培养。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

1. 在细胞未超过80%汇合度时，将培养液收集至离心管。若细胞密度超80%，则可进行传代。
2. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
3. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2 ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞是否变圆脱落。若细胞大部分脱落，迅速终止消化，加入5 ml以上的完全培养基。
4. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，转移至离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃上清，加入1-2 ml完全培养基重悬。
5. 按1:2比例分瓶传代，补充5-8 ml新培养基，放入37℃、5% CO2培养箱培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖瓶底80%时，弃去培养液并用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1 ml，倒置观察变圆后，加入5 ml完全培养基终止消化。
3. 转移悬液至离心管，在1000 RPM下离心5分钟，弃上清后加入1 ml无血清冻存液，混匀后放入冻存管。
4. 冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃下保存24小时后再转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，置于37℃水浴中快速解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5 ml完全培养基的离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃上清后，用5 ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，培养在37℃、5% CO2中。
4. 第二天更换为新鲜培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会脱落，这属于正常现象。如脱落过多，可将培养液收集于离心管中离心，以作过渡培养。加胰酶消化后，重悬细胞，再进行传代操作。
紧记在接收后48小时内联系918博天堂，以便处理任何问题。

五、售后条款

您在购买后如遇到细胞问题，可享受重发服务。请注意以下情况：
1) 运输中细胞丢失或瓶身破损，您可申请重发。
2) 收到后48小时内如发现污染，需及时反馈，以便重新发送。
3) 细胞存活率低等问题，需提供真实照片和实验结果。
4) 若因客户原因造成的污染或操作不当，则恕不重发。
请确保所有操作遵循918博天堂提供的正规流程，以保障细胞的健康成长和实验的顺利进行。