人肺动脉平滑肌HPASMC培养条件与方法

一、细胞培养条件

细胞名称：人肺动脉平滑肌HPASMC
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：SMCM（ScienCell，1101）
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：2天换液
备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如对比效果不理想，建议购买我们的完全培养基，优质的选择来自918博天堂。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，培养至良好状态后，用完全培养液填满并封闭瓶口，这是运输细胞的最佳方法。使用75%酒精喷洒细胞瓶以进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。用显微镜观察细胞生长并拍摄不同倍数的照片以作记录，建议拍摄40x, 100x, 200x的照片。前三天的照片为重要售后依据，如未提供照片则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将瓶中培养液收集至离心管，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，以不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状况，若细胞变圆并脱落，迅速将其取回，轻轻敲击培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例分瓶传代，补充5-8ml新的完全培养基至每瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至80%覆盖率时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻打使其脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后分装至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐保存，须在-80℃冷藏超过24小时后再转。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护用具），迅速放入37℃水浴中解冻至无结晶后，擦拭冻存管外壁以消毒。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，将沉淀重新加5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。
4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀后添加1-2ml胰酶，轻轻吹打以消化，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止反应。再离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基并重悬，按1:2比例分瓶传代，加入新的完全培养基至5-8ml每瓶，然后放入培养箱中继续培养。

五、售后条款

细胞出现问题时可重发的情况： 1. 运输过程中发生的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等；
2. 收到产品48小时内提出污染问题，提供真实实验结果后重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内大多数未存活，需提供真实的细胞状态照片； 4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时未开封，出现污染，重发；
5. 收到产品7天内提供细胞活力检测结果，符合标准后重发；
6. 收到当天及第2、3天内拍照，超过3天未告知视为合格产品；
7. 4-7天内出现问题的，需提供前3天照片及操作步骤，经技术人员判断后再重发。

细胞出现问题时不予重发的情况： 1. 客户造成的细胞污染；
2. 客户操作不当导致的细胞状态不佳；
3. 非本库推荐的培养体系导致细胞状态不良；
4. 未提供细胞培养前3天照片；
5. 细胞在培养过程中经其他处理；
6. 收到后2天内未告知的；
7. 视具体情况而定。