人骨肉瘤细胞HOS是重要的生物医疗研究细胞，本文将详细说明其培养及处理方法，以确保研究的顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞HOS
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% NEAA + 1% P/S
传代方法：首轮传代建议比率为1:2
备注：用无菌离心管收集培养基以进行对比实验。若对比效果不理想，建议直接使用918博天堂的完全培养基进行培养。

二、细胞处理

收到细胞后，在培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口为最佳处理方式。首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内严格操作。接着，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的细胞图像（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为关键售后依据，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞融合度未超过80%，请将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2培养；若细胞密度超过80%，需进行传代培养：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速加5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，然后吸出，转移悬液至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察至细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移悬液至15ml离心管中并离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液（如918博天堂的产品），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，如后需转入液氮罐中，则需在-80℃存放超24小时后再移入液氮罐中。

c、细胞复苏

1. 从液氮取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，至无结晶后用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，此为正常现象。若脱落严重，请将培养液收集至离心管并离心5分钟，收集上清用于过渡培养。然后加入胰酶重悬并消化，如此后需按比例进行分瓶传代（两个T25），再补充新完全培养基，并放入37℃、5% CO2培养箱中。

五、售后条款

918博天堂对细胞出现问题的处理有详细规定，以下情况可考虑重新发货： 1）细胞运输遭遇问题，例如丢失、瓶身破损等；
2）细胞污染问题需在收到产品48小时内提出并提供真实结果；
3）细胞活性问题在收到后的7天内需要提供真实实验结果。
特别提醒，如在收到细胞的活动中未进行告知，则视为产品合格，不予以重发。

通过上述措施，使用918博天堂的产品能够有效保障细胞培养的顺利进行，提升实验成功率。